Тестирование на ретровирусы

Методы обнаружения

Принципы метода

Нормативное регулирование

Анализ кокультивирования

В этом методе используются чувствительные индикаторные клетки для захвата инфекционных вирусных частиц и определения статуса заражения путем наблюдения за такими явлениями, как цитопатические эффекты, образование очагов или экспрессия специфического антигена. Он может продемонстрировать наличие инфекционных ретровирусных частиц.

• Обязательные объекты тестирования: клетки EOPC или клетки с ограниченным продуцированием-продукции.

• Основная процедура тестирования: необходимо использовать двухэтапную систему совместного-культурирования (фаза амплификации вируса и фаза индикатора активности).

• Требования к чувствительным клеткам. В зависимости от вида и происхождения тестируемых клеток для анализа ретровирусной инфекционности необходимо использовать разные или несколько чувствительных клеточных линий.

• Требования к пассированию культуры. Систему совместного культивирования необходимо пассировать не менее 5 раз (обычно больше), чтобы обеспечить адекватную амплификацию потенциального вируса.

Просвечивающая электронная микроскопия

В этом методе используется трансмиссионная электронная микроскопия с высоким-разрешением для непосредственного наблюдения морфологии и структуры вирусных частиц (например, типичной структуры икосаэдрической оболочки и морфологии нуклеокапсида), что обеспечивает визуальную идентификацию и количественный анализ. Он может обнаруживать известные и неизвестные вирусные частицы, в том числе не-реплицирующиеся частицы или те, которые не улавливаются анализами на инфекционность.

• Обязательные объекты тестирования: клетки EOPC или клетки с ограниченным продуцированием-продукции.

• Основное требование: необходимо определить тип и количество ретровирусных частиц.

• Требования к образцам: требуется получение ультратонких срезов, обычно требующее систематического наблюдения не менее чем за 200 клетками.

• Особые положения (Китайская Фармакопея 2025): Для некоторых клеток грызунов (например, CHO, BHK-21) или клеток насекомых также необходимо определить количество вирусных частиц в жидкости сбора и их инфекционность.

Анализ обратной транскриптазы

Основываясь на характеристике обратной транскриптазы, катализирующей синтез ДНК из матрицы РНК, наличие ретровирусов можно определить косвенно путем обнаружения радиоактивных или флуоресцентных сигналов продуктов реакции для количественной оценки активности фермента. Этот метод не зависит от вирусной инфекционности и позволяет проводить широкий скрининг вирусных частиц с ферментативной активностью.

• Объяснение освобождения: И ICH Q5A(R2), и Китайская фармакопея (издание 2025 г.) четко указывают, что этот тест не требуется для клеток, которые, как известно, продуцируют ретровирусы (например, клетки некоторых грызунов, насекомых и птиц).

• Альтернативные требования: В случаях исключения необходимо провести более комплексный тест на тип, количество и инфекционность вирусных частиц.

ПЦР или другие специфические методы in vitro.

В зависимости от видовой специфичности клеток, когда результаты активности обратной транскриптазы неясны или не могут быть измерены, можно использовать видоспецифичные методы обнаружения ретровирусов, такие как ПЦР ретровирусов, иммунофлуоресценция, ИФА и т. д. Количественная ПЦР ретровирусов также может использоваться для количественного определения ретровирусных частиц.

• Первичное позиционирование: обычно используется как важное дополнение к основным методам, упомянутым выше, и инструмент для подтверждения специфичности.

• Сценарии применения: обычно используются для высокочувствительного обнаружения и количественного определения конкретных известных вирусов (например, количественная ПЦР) или для получения доказательств на молекулярном- уровне, когда результаты инфекционности/электронной микроскопии сомнительны.

• Нормативно-правовая база: его применение требует тщательной проверки и должно соответствовать соответствующим руководствам по валидации конкретных методов обнаружения на целевом рынке (например, Китайской фармакопее (издание 2025 г.)).

Профессиональные услуги

Комплексная защита для вас

Глобальный подход к соблюдению требований

Наши методы тестирования глубоко интегрированы с основными требованиями ICH Q5A(R2), Китайской фармакопеи (2025), USP и EP, предоставляя комплексные услуги, охватывающие тестирование на инфекционность, трансмиссионную электронную микроскопию (TEM) и обнаружение активности обратной транскриптазы, эффективно поддерживая одновременное применение в нескольких регионах, включая Китай, США и Европу.

Возможность обнаружения широкого-спектра спектра.

У нас есть множество чувствительных клеточных линий и проверенные методы для различных сценариев риска, которые могут эффективно обнаруживать целевые патогены, включая ретровирусы мышей, ретровирусы тропизма и ретровирусы насекомых, обеспечивая широкий спектр и специфичность обнаружения.

Собственная платформа электронной микроскопии

У нас есть собственный трансмиссионный электронный микроскоп высокого-разрешения и высокопрофессиональная техническая группа, обеспечивающая замкнутый-контроль качества на протяжении всего процесса — от подготовки проб до вывода данных. Мы также можем предоставить услуги по быстрому количественному анализу сырья (UPB) для точной поддержки последующей проверки очистки от вирусов.

Комплексная проверка метода

Все методы выполняются в соответствии со стандартами GMP/GLP, в строгом соответствии с Китайской фармакопеей (издание 2025 г.) и ICH Q2(R2) для всесторонней проверки специфичности, пределов обнаружения и т. д. Мы обеспечиваем полный-управление проектом — от разработки протокола до поддержки приложений, гарантируя соответствие данных и надежность.

Защита целостности данных

От получения образцов и проведения экспериментов до выдачи отчетов, мы создали полную систему качества, соответствующую принципам GMP и ALCOA+. Благодаря профессиональному многоуровневому анализу данных-и надежному механизму контроля отклонений (CAPA) мы существенно обеспечиваем высокое-качество и контролируемую реализацию каждого проекта.